因為紫外吸收測試的時候需要測的是光線通過比色皿前后的差別，光是直線的，所以兩面透光就夠了。而熒光測試的需要一束激光照在比色皿上，然后在另外一邊檢測溶液的發光。
由于光是直線傳播的，所以檢測器不能在激光源的對面放置（如果放在光源的對面，檢測的就是光源的光譜），事實上檢測器，光源和比色皿之間是90度角的關系，所以熒光比色皿需要四面全透。
熒光光度計收集的是受激分子發射的光譜。為了避免激發光，反射光進入檢測器而造成誤差，入射光源和檢測器的方向垂直。
由高壓汞燈或氙燈發出的紫外光和藍紫光經濾光片照射到樣品池中，激發樣品中的熒光物質發出熒光，熒光經過濾過和反射后，被光電倍增管所接受，然后以圖或數字的形式顯示出來。
不同物質由于分子結構的不同,其激發態能級的分布具有各自不同的特征，這種特征反映在熒光上表現為各種物質都有其特征熒光激發和發射光譜；，因此可以用熒光激發和發射光譜的不同來定性地進行物質的鑒定。
